4-demetilviozino susidarymą katalizuojančių fermentų TYW1/Taw1 palyginimas mielėse ir archėjose
Mališauskas, Ričardas | Recenzentas / Rewiewer |
Transportinė RNR pasižymi labai didele potranskripcinių modifikacijų įvairove. Viena iš tokių sudėtingų modifikacijų, randamų tiek eukariotuose, tiek archėjose, yra viozino dariniai. Viozino dariniai yra tricikliai imidazopurinai, gaunami iš guanozino ir randami tRNAPhe 37 vietoje. 4-demetilviozino susidarymas katalizuojamas Tyw1 fermento mielėse ir Taw1 fermento archėjose. Mielių Tyw1 baltymas nuo archėjų Taw1 baltymo skiriasi tuo, kad turi flavodoksiną panašų domeną, kuris suriša FMN. Šiame darbe atlikta mielių Saccharomyces cerevisiae Tyw1 rekombinantinio baltymo flavodoksino domeno delecija, raiškos vektorius pET21a+ su perkoduotu Saccharomyces cerevisiae TYW1 genu buvo transformuotas į Escherichia coli BL21(DE3) kompetentines ląsteles ir atliktas gauto baltymo gryninimas atliekant afininę metalų jonų chromatografiją.Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir metodai, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros šaltiniai.Darbo apimtis: 67 psl., 23 paveikslai, 10 lentelių, 1 grafikas ir 58 bibliografiniai šaltiniai
Transfer RNA is characterized by a wide variety of post-transcriptional modifications. One of these complex modification, found in both eukaryotes and archaea, is wyosine derivatives. Wyosine derivatives are tricyclic imidazopurines derived from guanosine and found at site 37 of tRNAPhe. The formation of 4-dimethylwyosine is catalysed by the Tyw1 enzyme in yeast and the Taw1 enzyme in archaea. The yeast Tyw1 protein is different from the archaeal Taw1 protein by possessing a flavodoxin-like domain that binds FMN. In the present work, an deltion of amino acids of the yeast Saccharomyces cerevisiae Tyw1 recombinant protein was performed, the expression vector pET21a+ with the recorded Saccharomyces cerevisiae TYW1 gene was transformed into Escherichia coli BL21(DE3)-competent cells and the resulting protein was purified by affinity metal ion chromatography. The work consists of six parts: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusions, references.The thesis consists of 67 pages, 23 figures, 10 tables, 1 graph and 58 bibliographic sources.