Vapsvų alergenų biosintezė, gryninimas bei taikymas alergijoms diagnozuoti
Mlynska, Agata | Recenzentas / Rewiewer |
Baigiamajame magistro darbe aprašyti vapsvų nuodų rekeombinantinių alergenų sulietų su maltozę rišančiu baltymu (MBP), biosintezė, gryninimas ir antigenininių savybių tyrimai.Manoma, kad 2025 m. daugiau nei 50 % Europos populiacijai bus būdingos bent vieno tipo alergijos. Pačios reikšmingiausios alerginės reakcijos gali iššaukti sunkią alerginę reakciją - anafilaksinį šoką. Blogiausiu atveju anafilaksinis šokas gali baigtis mirtimi. Tai viena iš priežasčių, kodėl alergijų diagnostika yra tokia svarbi, nes žinant tikslius alergenus, kurie gali sukelti alerginę reakciją, galima pritaikyti apsisaugojimo ar gydymo metodus.Alergijų diagnostika susideda iš in vivo ir in vitro diagnostinių testų. Tiek in vivo ir in vitro alergijų diagnostikoje vis dar plačiai yra naudojami baltymų ekstraktai, kurie ne visada yra veiksmingi nustatant tikrąją alergijos priežastį. Rekombinantinių alergenų naudojimas diagnostikoje leidžia itin tiksliai išsiaiškinti alergiją sukeliantį šaltinį.Šiame darbe numatyta susintetinti ir apibūdinti dviejų pagrindinių Europoje vapsvų rūšių Vespula vulgaris (Ves v) ir Polistes dominulus (Pol d) nuodų alergenų komponentus. Darbo metu buvo atlikta rekombinantinių rVes v 1, rVes v 2, rVes v 3, rVes v 5 ir rPol d 5 vapsų nuodų alergenų sulietų su maltozę surišančiu baltymu (MBP) sintezė Escherichia coli bakterijų raiškos sistemoje. Susintetinti baltymai išgryninti afininės chromatografijos metodu. Rekombinantinių alergenų antigeninės savybės tirtos naudojant imunocheminius analizės metodus su pacientų įsijautrinusių į vapsvų nuodus kraujo serumo mėginiais. Įvertinta, kad natūraliems alergenams specifiški IgE atpažįsta rekombinantinių baltymų epitopus ir susintetintus rekombinantinius baltymus galima panaudoti kuriant mikrogardelę skirta alergijoms diagnozuoti.Darbą sudaro aštuonios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir inventorius, metodai, eksperimentų rezultatai, rezultatų aptarimas, išvados ir literatūros sąrašas.Darbo apimtis 68 puslapiai, 21 paveikslas, 9 lentelės ir 59 bibliografiniai šaltiniai.
Master's thesis describes the biosynthesis, purification and antigenic properties studies of recombinant wasp venom allergens fused to maltose binding protein (MBP).It is estimated that in 2025 more than 50% of the European population will have at least one type of allergy. The most significant allergic reactions can cause a severe allergic reaction - anaphylactic shock. In the worst case, anaphylactic shock can be fatal. This is one of the reasons why the diagnostics of allergies is so important, knowing the exact allergens that can cause an allergic reaction can be used to implement prevention methods or to treat allergy.The diagnosis of allergies consists of in vivo and in vitro diagnostic tests. Protein extracts are still widely used in both in vivo and in vitro allergy diagnostics and are not always effective in determining the true cause of allergies. The use of recombinant allergens in diagnostics makes it possible to identify the source of the allergy with great precision.The aim of this work is to synthesize and describe the wasp venom allergen components of Vespula vulgaris (Ves v) and Polistes dominulus (Pol d), these wasps are most common wasp species in Europe. The synthesis of recombinant rVes v 1, rVes v 2, rVes v 3, rVes v 5 and rPol d 5 wasp allergens fused to maltose binding protein (MBP) in the expression system of Escherichia coli was performed. The synthesized proteins were purified using affinity chromatography. The antigenic properties of recombinant allergens were investigated using immunochemical analysis methods with blood serum samples from patients sensitized to wasp venom.It has been suggested that specific IgE formed against natural allergens recognize epitopes of recombinant proteins, so the synthesized proteins can be used to develop a microarray for the allergy diagnostics.The work consists of eight parts: introduction, literature review, materials and inventory, methods, experimental results, discussion of results, conclusions and references.Thesis consists of 68 pages, 21 figures, 9 tables and 59 bibliographical entries.