Stabilių žmogaus ląstelių linijų bibliotekos kūrimas panaudojant cheminius ir biologinius transfekcijos metodus
Rutkauskas, Mindaugas |
Ląstelės biologijos ir proteonomikos tyrimams naudojami įvairūs metodai siekiant nustatyti baltymo buvimo vietą ir funkciją ląstelėje. Panaudojant DNR konstruktus, koduojančius sulietus fluorescuojančio baltymo ir baltymo taikinio genus, gaunama didelio specifiškumo neinvazyvi sistema baltymo tyrimams ląstelėje in vivo.Baigiamojo darbo metu transfekuotų organoidams specifinių žymenų raiška buvo patikrinta žmogaus fibroblastų HEK293 ląstelių linijoje. Sukurta organoidams specifinių žymenų DNR biblioteka, kurią sudaro DNR konstruktai specifiški pagrindinėms ląstelės struktūroms. Panaudojus cheminius ar biologinius transfekcijos metodus pasirinktų žymenų perkėlimui į ląsteles ir auginant ląsteles terpėje su antibiotikais, buvo sukurtos stabilios HEK293, MSC, MCF7 ir HeLa ląstelių linijos.Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir metodai, tyrimų rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros sąrašas. Darbo apimtis - 64p. teksto be priedų, 17 iliustr., 19 lent., 49 bibliografiniai šaltiniai.
Various methods are used in cell biology and proteomics to determine the localisation and function of proteins of interest. Using DNA constructs encoding gene of interest fused with fluorescent protein (FP) the non-invasive and high affinity system is obtained, which could be used for in vivo protein research.The final master thesis analyses various organelle-specific genes fused with fluorescent proteins in HEK293 cell line. During our work the DNA library of such constructs expressing organelle specific protein-FP complex has been created. By using chemical and biological transfection methods and growing cells in selective medium with antibiotics stable HEK293, MSC, MCF and HeLa cells lines expressing chosen DNA constructs have been obtained.Structure: introduction, introduction, literature overview, materials and methods, results, conclusions, references. Thesis consist of: 64 p. text without appendixes, 17 pictures, 49 tables, 49 bibliographical entries.