Ląstelės šeimininkės transliacijos aparato baltymų panaudojimas lizinių bakteriofagų infekcijos metu
Juškauskas, Augustinas |
Virusus vienijanti savybė yra ta, kad jų dauginimuisi yra reikalinga gyva ląstelė šeimininkė. Ląstelės aplinkos pajungimas virusų vystymuisi da?niausiai vyksta modifkuojant ir panaudojant jos esminių sistemų baltymus. Bakteriofagai (fagai), kaip ir visi virusai, yra ypač priklausomi nuo ląstelės šeimininkės transliacijos aparato, būtino virusinių baltymų sintezei, tačiau kol kas yra ?inomi tik vienetiniai šių baltymų modifikavimo ir panaudojimo atvejai. Nors pastaruoju metu fagų genomuose randama koduojamų transliacijos baltymų homologų, jų funkcijos kol kas labai ma?ai tirtos. Dėl to, šiame darbe buvo tiriama Escherichia coli lizinių fagų priklausomybė nuo ląstelės šeimininkės transliacijos baltymų bei galimos jų modifikacijos per sąveikas su fagų baltymais. Darbo metu buvo sukonstruotos rekombinantinės plazmidės, koduojančios kai kuriuos E. coli transliacijos aparato baltymus, bei gauti E. coli mutantai, tinkami baltymų sąveikų bei funkcijų tyrimams in vivo. Panaudojant gautus konstruktus giminingumo chromatografijos būdu buvo išgryninti keturi E. coli ribosominių baltymų kompleksai su fagų baltymais, kurie buvo patvirtinti proteominiais metodais. Naudojant sukonstruotus E. coli mutantus buvo patvirtinta tirtų fagų vystymosi bei atskirų procesų priklausomybė nuo ląstelės šeimininkės transliacijos aparato. Tolimesni šiame darbe aptiktų sąveikų tyrimai gali padėti išaiškinti naujus ląstelės šeimininkės ribosominių baltymų panaudojimo faginėse infekcijose mechanizmus. Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros ap?valga, med?iagos ir metodai, rezultatai ir jų aptarimas, išvados ir literatūros sąrašas. Darbo apimtis: 47 p. teksto be priedų, 16 iliustr., 9 lent., 92 bibliografiniai šaltiniai, 1 priedas
The unifying feature of all viruses is that a living host-cell is necessary for their reproduction. The employment of the cellular environment for virus production is usually achieved through the modification and use of proteins of the cells essential systems. Bacteriophages (phages), like all viruses, are particularly dependent on the host cell translation apparatus, which is necessary for the synthesis of viral proteins, but few cases of modification and use of these proteins have been described so far. Although the homologues of some translation proteins have been detected in the genomes of phages, their functions are as of yet scarcely elucidated. Therefore, in this work, the dependence of Escherichia coli lytic phages on host-cell translation proteins, as well as their possible modifications by interaction with phage proteins, were investigated. During the work, recombinant plasmids encoding certain E. coli translation apparatus proteins were constructed, and E. coli mutant strains, which are suitable for in vivo studies of protein interactions and functions, were obtained. Using the obtained constructs, four E. coli ribosomal protein complexes were purified by affinity chromatography, which were confirmed by proteomic methods., The dependence of certain processes and development of the phage on the host-cell translation apparatus was confirmed in vivo using the constructed E. coli mutants. Further research on the protein interactions detected in this study, may help elucidate new mechanisms of the use of host-cell ribosomal proteins in phage infections. The work consists of six parts: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusions, references. Structure: 47 p. text without appendixes, 16 pictures, 9 tables, 92 bibliographical entries, 1 appendix