Biolustas pavienių ląstelių metabolinio aktyvumo registravimui
Baigiamojo magistro darbo metu buvo kuriamas biolustas, skirtas pavienių ląstelių metabolinio aktyvumo tyrimams. Biolustą sudaro ant bioinertiško polietilenglikolio hidrogelio mikroantspaudavimo būdu suformuoti pavienių ląstelių adhezijai palankūs fibronektino baltymo diskai. Molekulinių fluorescuojančių metabolitų sensorių imobilizavimui adheziniai diskai buvo papildomai funkcionalizuoti inkarinėmis grupėmis: biotinilu, streptavidinu ir cheminiu chelatoriumi (nitrilotriacetine rūgštimi, NTA). Paaiškėjo, kad NTA grupės labiausiai tiko molekulinių metabolitų sensorių imobilizavimui. Pademonstruota, kad aktyvių NTA grupių tankis adheziniame diske tiesiškai priklauso nuo NTA darinio dalies mikroantspaudavimo „rašale”. NTA grupių aktyvumas rutiniškai tikrintas atliekant polihistidinų fragmentą turinčio baltymo imobilizavimą. Biolustų tyrimu metu, atliktų EPFL institute Šveicarijoje, nustatyta, kad a) NTA funkcinės grupės netrukdo HeLA ir UO2S ląstelių adhezijai; b) molekulinis, Foersterio sužadinimo energijos pernašos būdu veikiantis, NADP+ sensorius imobilizuodavosi ant NTA grupių ir išlikdavo aktyvus; c) Molekuliniai sensoriai netrukdė UO2S ląstelių adhezijai. Atlikus biolustų tyrimus, FTMC ląstelių laboratorijoje, nustatyta, kad ATCC BJ-5ta-GFP odos fibroblastų adhezijai NTA grupės netrukdo.Darbą sudaro 7 dalys: įvadas, santrumpų sąrašas, literatūros apžvalga, medžiagos, metodai, aparatūra, tyrimo rezultatai ir aptarimas, išvados, literatūros sąrašas. Darbo apimtis - 44 p. teksto be priedų, 19 iliustr., 66 bibliografiniai šaltiniai.
Aim of this master thesis was to create a biochip for research of single cell metabolic activity. Biochip consists of bioinert polyethylene glycol hydrogel, on which through micro contact printing of fibronectin, adhesion disks for single cells were formed. To immobilize molecular fluorescent metabolite sensors adhesion disks were functionalized with affinity groups: biotin, streptavidine and chemical chelator group - nitrilotriacetic acid (NTA). It was observed, that NTA groups were the most fitted to immobilize molecular metabolite sensors. It was shown, that density of active NTA groups in adhesion disk, depends linearly on NTA conjugate part in micro printed „ink”. Activity of NTA groups were routinely checked by immobilization of protein with polyhistidine tag. During experiments at EPFL, Switzerland, it was determined, that: a) NTA functional groups do not inhibit HeLa and UO2S cells adhesion; b) molecular, Förster resonance energy transfer based, NADP+ sensor was immobilized successfully on NTA groups and stayed active; c) molecular metabolite sensors do not inhibit UO2S cells adhesion. After biochips were tested at FTMC cell laboratory, it was determined that NTA groups do not inhibit adhesion of ATCC BJ-5ta-GFP foreskin fibroblasts.Structure: introduction, list of abbreviations, review of literature, materials, equipment, methods, results and discussion, conclusions, references. Thesis consist of: 44 p. text without appendixes, 19 pictures, 66 bibliographical entries.No appendixes included.