Baltymų konjugavimo su magnetinėmis dalelėmis tyrimai
RNR naudojama įvairiuose tyrimuose biotechnologijos, genetikos, biochemijos, medicinos ir kitose srityse, atliekant atvirkštinės transkripcijos polimerazinę grandininę reakciją, genų raiškos tyrimus ir t.t. Darbas su RNR reikalauja švaros ir atsargumo, nes RNR yra linkusi degraduoti. Pagrindinė RNR degradavimo priežastis - RNazės. Yra žinoma būdų, kaip iš tirpalų pašalinti RNazes, tačiau jie ilgai užtrunka, yra sudėtingi, brangūs ir ne visada veiksmingi. Ypač sunku ribonukleazes pašalinti iš baltyminių tirpalų. Ribonukleazių inaktyvavimui dažnai naudojami ribonukleazių slopikliai, kurie susijungdami su ribonukleazėmis slopina jų veiklą, tačiau po inaktyvacijos tirpale lieka slopiklio priemaišos, kurios gali trukdyti tolimesniam darbui su baltymais. Vienas iš būdų išvengti šių priemaišų yra konjuguoti ribonukleazių slopiklį su magnetinėmis dalelėmis. Konjuguotam slopikliui specifiškai susirišus su ribonukleazėmis, magnetinės dalelės kartu su slopikliu ir RNazėmis pašalinamos iš baltyminių tirpalų magneto pagalba nepaliekant papildomų priemaišų. Baigiamojo magistro darbo metu buvo parinktas tinkamas konjugavimui ribonukleazių slopiklis ir konjuguotas su magnetinėmis dalelėmis. Darbo metu tirtas konjugavimas su skirtingas funkcines grupes turinčiomis magnetinėmis dalelėmis, optimizuotas konjugavimo procesas ir atrinktas daugiausiai ribonukleazių surišantis slopiklio ir dalelių konjugatas.
In biotechnology, genetics, biochemistry, medicine and other fields, RNA is used in the reverse transcription polymerase chain reaction, gene expression studies and etc. RNA tends to easily degrade therefore work with it should be careful and clean. Main cause of RNA degradation are RNases. There are known several ways how to remove RNases from solutions, but they are long-lasting, complex, expensive and not always effective. It is extremely difficult to remove ribonucleases from protein solution. Commonly RNase inhibitors are used to inactivate RNases, but after RNase inactivation inhibitor impurities remains in solution and afterwards these impurities can interfere further work with proteins. One way to avoid these impurities is to conjugate ribonucleases inhibitor with magnetic beads. After specific binding of inhibitor with RNases, magnetic beads together with inhibitor and RNases are separated from protein solutions using magnetic field. This approach allows to avoid of remaining contaminants in protein solution. In the master thesis suitable RNase inhibitor was selected and conjugated with magnetic beads. Conjugation of inhibitor with magnetic beads containing different functional groups was investigated, optimal conjugation conditions determined and magnetic bead and inhibitor conjugate with largest capacity to bind ribonucleases was selected.