Glicino, betaino ir sorbitolio įtaka rekombinantinių augimo hormonų intarpinių kūnelių susidarymui Escherichia coli ląstelėse
Šiame darbe buvo tiriama glicino, betaino ir sorbitolio įtaka rekombinantinių augimo hormonų intarpinių kūnelių susidarymui Escherichia coli ląstelėse. Darbo metu buvo ištirta glicino, betaino ir sorbitolio įtaka rekombinantinio aAH ekspresijai ir pasiskirstymui tirpių ir netirpių ląstelės baltymų frakcijose. Buvo atlikti kontroliniai producento auginimai terpėje be priedų. Osmolitų poveikis buvo įvertintas lyginant su kontrolinių auginimų metu gautais rezultatais. Kultivavimo terpėje esant betaino ir glicino, bendras aAH ekspresijos lygis ir kiekis intarpiniuose kūneliuose mažėja, o esant sorbitolio bendras aAH ekspresijos lygis nesikeičia, beveik visas tikslinis baltymas kaupiasi intarpiniuose kūneliuose. Netirpių baltymų frakcijose ~45-40 kDa baltymų juostelių intensyvumas pasikeičia, lyginant su kontroliniais auginimas. Taip pat pastebėta osmolitų savybė įtakoti intarpinių kūnelių heterogeniškumą. INF-alfa 5 intarpiniuose kūneliuose identifikuoti elongacijos faktorius Tu, INF-alfa 5 dimeras, išorinės membranos baltymas A ir beta-laktamazė. Šių baltymų kiekis intarpiniuose kūneliuose, kultivuojant skirtingomis sąlygomis, skiriasi.Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūrinos apžvalga, eksperimentinė dalis, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros sąrašas. Darbo apimtis - 63 p. teksto be priedų, 16 iliustr., 13 lent., 38 bibliografiniai šaltiniai.
The influence of glycine, betaine and sorbitol on the formation of growth hormone inclusion bodies in Escherichia coli was investigated in this work. The E. coli strain was cultivated in the media in the presence and in the absence of osmolytes. The distribution of the target protein among the soluble and insoluble fraction of cellular proteins as well as the total expression level of the target protein was analyzed. The total expression level of mGH and the percentage of the target protein in the insoluble fraction of cellular proteins decreased in the presence of betaine or glycine in the cultivation media. Sorbitol had no effect on the total expression level of the target protein. The influence of osmolytes on the heterogeneity of inclusion bodies was observed. Some changes of the intensity of protein bands in the molecular mass region of 40-45 kDa was found, too. Elongation factor Tu, INF-alfa 5 dimer, outer membrane protein A and beta-lactamase were identified in the inclusion bodies of INF-alfa 5. Moreover, the percentage of these proteins depended on cultivation conditions, i.e. in the presence or in the absence of osmolytes in the media. Structure: introduction, part of theory, experimental part, results and discussion, conclusions, references. Thesis consist of: 63 p. text without appendixes, 16 pictures, 13 tables, 38 bibliographical entries.