Metileno mėlio įtakos žmogaus superoksido dismutazės I ir insulino amiloidinei agregacijai nustatymas
Amiotrofinė lateralinė sklerozė - nepagydoma neurodegeneracinė liga, kuria sergančių pacientų organizmuose žūva motoriniai neuronai. Pirmas atrastas ir dažniausiai su šia liga siejamas baltymas yra superoksido dismutazė I, kurios gausias beta klostes turintys amiloidiniai agregatai randami ligonių nervų sistemoje. Skaičiuojama, kad ateityje dėl visuomenės senėjimo sergamumas šia liga didės, tad dedamos didžiulės pastangos siekiant sukurti vaistus jos gydymui. Vienas iš potencialių vaistų yra metileno mėlis; jau yra įrodytas šio junginio efektyvumas moduliuojant kitų amiloidinių baltymų agregaciją. Šio magistro darbo tikslas - patikrinti metileno mėlio įtaką superoksido dismutazės I ir modelinio baltymo insulino, dažnai naudojamo vaistų neurodegeneracinių ligų gydymui paieškoms, amiloidinei agregacijai.Darbo metu chromatografiniais metodais išgryninta 1207 mg rekombinantinio superoksido dismutazės I baltymo. Baltymų agregacija stebėta fluorescencinės spektroskopijos metodu, agregatų antrinė struktūra tirta Furjė transformacijos infraraudonųjų spindulių spektroskopijos, morfologija - atominės jėgos mikroskopijos metodais.Nustatyta, kad veikiant metileno mėliu sulėtėja superoksido dismutazės I agregacijos kinetika, pakinta agregatų struktūra ir morfologija. Tuo tarpu junginys insulino agregacijai įtakos nedaro.Darbą sudaro 6 dalys: įvadas; literatūros apžvalga ir analizė; prietaisai, medžiagos ir metodai; rezultatai ir jų aptarimas; išvados ir literatūros sąrašas; priedai.Darbo apimtis: 65 lapai teksto be priedų, 35 paveikslai, 4 lentelės, 110 bibliografinių šaltinių. Atskirai pridedamas darbo priedas.
Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) belongs to a group of neurodegenerative diseases and results in motor neuron death. Superoxide dismutase I (SOD1), forming beta sheet rich deposits in human nervous system, is the most commonly associated protein with the disorder. It is estimated that the number of ALS cases will increase due to ageing of the population, therefore a lot of effort is being put in order to find an effective therapy for the disease. One of the potential drugs investigated is a small-molecule compound methylene blue, that has already been shown to effectively modulate aggregation pathways of other amyloidogenic proteins. Therefore the aim of this thesis is to determine the impact of methylene blue on aggregation of superoxide dismutase I and insulin, which is commonly used as a model protein in anti-aggregation drug screenings.During preparation of the thesis 1207 mg of recombinant superoxide dismutase I was purified using liquid chromatography methods. Kinetics of protein aggregation was followed by the means of fluorescence spectroscopy; secondary structure of aggregates was established by using Fourier transform infrared spectroscopy and finally, atomic force microscopy was utilized to determine morphology of aggregates.The study revealed that mehylene blue acts as an amyloid remodelling agent on SOD1 while insulin aggregation remains largely unaffected.Structure of the thesis: introduction; literature review; materials and methods; results and discussion; conclusions; references; appendices.Thesis consists of: 65 p. text without appendices, 35 figures, 4 tables, 110 bibliographical entries. Appendice added separately.