Žmogaus mezenchiminių kamieninių ląstelių tyrimai, panaudojant bioreaktorių ir mikropernešėjų technologijas
Pastaraisiais metais vis dažniau įvairių ligų gydymui naudojama kamieninių ląstelių terapija. Paprastai ląstelės kultivuojamos dvimatėje aplinkoje, kuri neatspindi žmogaus audinių struktūros trimatėje aplinkoje. Todėl siekiant atkartoti ląstelių savybes in vivo laboratorinėmis sąlygomis, kuriamos naujos trimatės kultivavimo technologijos. Viena iš trimačių auginimo sistemų yra ląstelių kultivavimas ant mikropernešėjų. Trimatės aplinkos poveikio žmogaus mezenchiminių kamieninių ląstelių funkcinėms savybėms nustatymui naudojome bioreaktoriaus BioLevitator ™ ir mikropernešėjų (The Global Eukaryotic Microcarrier (GEM ™)) technologiją. Tyrimams naudojome GEM dengtus lamininu, parinkta inokuliacijos trukmė - 4 val., ląstelės augintos terpėje be serumo (MSC Nutristem XF Medium). Siekiant palyginti imunofenotipo pokyčius buvo atlikta tėkmės citometrija. Nustatyta, kad mezenchiminių kamieninių ląstelių CD14, CD271, CD34, CD45, CD73, CD90 paviršiaus žymenų raiškai auginimo aplinka įtakos neturi, tačiau ląstelių kultivuotų trimatėje aplinkoje žymenų CD105, CD146 ekspresija sumažėja. Siekiant nustatyti bei palyginti ląstelių sekretomus, buvo atlikta imunofermentinė analizė bei proteominė egzosomų analizė. Gauti rezultatai rodo, kad trimatės kultivavimo sąlygos daro įtaką MKL sekretomo bei produkuojamų egzosomų sudėčiai.Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir metodai, tyrimų rezultatai ir jų aptarimas, išvados ir literatūros sąrašas. Darbo apimtis - 46 p. teksto be priedų, 12 paveikslų, 1 lentelė, 59 bibliografiniai šaltiniai.
Past years, stem cell therapy was used more and more frequently for the treatment of various diseases. Typically, cells are cultured in two-dimensional environment which does not reflect the structure of the human tissue in three-dimensional environment. Therefore, in order to replicate the in vivo properties of the cells in lab, new three-dimensional cultivation technologies are developed. The cell cultivation on microcarriers is one of the three-dimensional cultivation systems. To determine the effects of three-dimensional environment to human mesenchymal stem cell functional properties we used bioreactor BioLevitator ™ and microcarriers (The Global Eukaryotic Microcarrier (GEM ™)) technology. For the researches we used a laminin-coated GEM, selected inoculation time was 4 hours., the cells were grown in serum-free medium (MSC Nutristem XF Medium). In order to compare changes of immunophenotype flow cytometry method was used. It was found that the expression of mesenchymal stem cell surface markers (CD14, CD271, CD34, CD45, CD73, CD90) was not affected by the growth environment, but expression markers CD105, CD146 was reduced for the cells cultured in three-dimensional environment. In order to determine and to compare cell secretomes we have performed an enzyme-linked immuno assay and proteomic analysis of the exosome. The obtained results have shown that three-dimensional culture conditions influence the composition of MSC secretome and produced exosome.Structure: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusions and references.Thesis consist of: 46 p. text without appendixes, 12 pictures, 1 table, 59 bibliographical entries.