Onkostatino M geno klonavimas ir baltymo raiška bakterijų ir mielių ląstelėse
Šio baigiamojo darbo tikslas yra onkostatino M geno klonavimas ir baltymo raiškos analizė bakterijų ir mielių ląstelėse. Susidomėjimas onkostatinu M kyla dėl jo didelio potencialo medicininėje praktikoje, nes būtent šis citokinas pasižymi kaip vėžį slopinantis gėrybinis citokinas, kuris skatina uždegiminį atsaką ir reguliuoja ląstelių augimą bei diferenciaciją. Darbas atliktas keliais etapais. Pirmojo etapo metu OSM genas buvo pagausintas PGR metu ir liguotas su pET21a+ vektoriumi, siekiant gauti rekombinantinį Escherichia coli producentą, efektyviai ir kontroliuojamai sintetinantį tikslinį baltymą. Patikrinus 3 bakterinius raiškos kamienus (BL21(DE3), K802, Rosetta gami-2) ir parinkus optimalias augimo sąlygas E.coli Rosetta gami-2 kamiene tikslinio baltymo raiška siekia 14.19 % visų ląstelės baltymų. Antrojo etapo metu sukurta rekombinantinė DNR buvo pagausinta PGR būdu ir liguojama su bifunkciniu pKLAC2 vektoriumi bei transformuojama į K.lactis GG799 rekombinantinį kamieną, siekinat baltymo raiškos eukariotinėje sistemoje. Auginant ląsteles indukuojančioje terpėje baltymo raiška nustatoma Western-blot metodu. Darbą sudaro 6 dalys: įvadas, literatūros apžvalga, eksperimentinė dalis, rezultatai ir jų aptarimas, išvados ir pasiūlymai, literatūros sąrašas.Darbo apimtis - 82 p. teksto be priedų, 29 iliustr., 10 lent., 47 bibliografiniai šaltiniai.Atskirai pridedami darbo priedai.
The purpose of this final job is cloning and expression of oncostatin M in bacteria and yeast cells. Interest of oncostatin M is due to its high potential for medical practice, also OSM causes a wide range of inflammation - modulating activities cytokine by regulating several cytokine networks, including cell growth and differentiation.The work has several stages. During the first stage of this work OSM gene was amplified by PCR and cloned into pET21a+ plasmid to obtain recombinant E.coli producent that allows efficient and controlled expression of target protein. After expression analysis in three bacterial strains (BL21(DE3), K802, Rosetta gami-2) and selecting the growth conditions, the expression level of the target protein is 14.19 % of all cell proteins in E.coli Rosetta gami-2 strain. During the second stage of this work created recombinant DNA was amplified by PCR and cloned into bifunctional pKLAC2 plasmid also transformed into K. lactis recombinant strain GG799 for expression of target protein in eukaryotic system. Growing cells in inducing culture medium protein expression level detectable by Western-Blot hybridization. Work consists of: introduction, literature part, experimental part, results and discussion, conclusions and suggestions, references. Thesis consist of: 82 p. text without appendixes, 29 pictures, 10 tables, 47 bibliographical entries.Appendixes included.