p120GAP baltymo mutantų konstravimas ir charakterizavimas
Šiame darbe buvo tiriama p120GAP baltymo prolingų sekų sąveika su Nck1 baltymu ir minėtų sekų vaidmuo HepG2 (žmogaus kepenų) ląstelių mitochondrijų dinamikoje. Tam buvo sukonstruoti eukariotiniai raiškos vektoriai, koduojantys p120GAP prolingas sekas, sulietas su c-myc (EQKLISEEDL) epitopu ir žaliai fluorescuojančio baltymo (GFP) seka. p120GAP baltymo konstruktai buvo identifikuojami naudojant antikūnus, specifiškai atpažįstančius c-myc peptido seką ir pagal žalios spalvos GFP baltymo fluorescenciją. In vitro buvo nustatyta, kad p120GAP prolingos sekos sąveikauja su Nck1 baltymo SH3 domenais ir minėtų sąveikų ryšys yra tiesioginis. Konfokaliosios mikroskopijos metodu preliminariai įvertintas prolingų sekų poveikis HepG2 ląstelių mitochondrijų dinamikai.
In this study the protein's p120GAP proline-rich sequences interaction with Nck1 and last mentioned sequences role in mitochondrial dynamics in human liver cells (HepG2) was investigated. For this eukaryotis expression vectors coding for p120GAP protein proline-rich sequences fused with c-myc (EQKLISEEDL) epitope and green fluorescent protein (GFP) sequence have been constructed. p120GAP protein constructs were identified using specific antibodies against c-myc epitope and visualizing GFP fluorescence. Here data show that p120GAP proline-rich sequences are needful for interaction with Nck1 protein's SH3 domains in vitro and this interaction is direct. Applying confocal microscopy methods there was found that mitochondrial dynamics changes upon p120GAP protein proline-rich sequences expression in HepG2 cell line.