Hidrofobinų gryninimas ir pritaikymas paviršiams dengti
Ratautas, Dalius | Recenzentas / Rewiewer |
Bironaitė, Daiva | Darbo gynimo komisijos pirmininkas / Thesis Defence Board Chairman |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member |
Hidrofobinai yra iki 20 kDa dydžio pelėsinių grybų išskiriami baltymai, kurie sugeba spontaniškai susirinkti į amfifilinius sluoksnius ant hidrofobinių-hidrofilinių paviršių ir pakeisti jų savybes. Šias unikalias savybes nulemia jų sudėtyje esantys 8 cisteinai, sujungti disulfidiniais ryšiais ir bifunkcinė molekulinė struktūra, turinti hidrofilinę ir hidrofobinę puses. Dėl šių priežasčių hidrofobinai jau yra plačiai naudojami siekiant pagerinti medžiagų stabilumą, slopinant medžiagų imunogeniškumą, pakeičiant medžiagų hidrofilines ar hidrofobines savybes bei keičiant imobilizuotų molekulių aktyvumą.Baigiamajame magistro darbe buvo tiriamas aukso nanodalelių savybių pakitimas jas padengus hidrofobinais. Šiam tikslui į Escherichia coli BL21 (DE3) kamieną buvo įterpta plazmidė su AfRodA baltymą koduojančiu genu. Vėliau buvo vykdoma šio baltymo raiška ir gryninimas afininės chromatografijos būdu. Išgrynintas biologiškai aktyvus baltymas buvo naudojamas aukso nanodalelių paviršiaus padengimui. Padengimo efektyvumas buvo tiriamas fluorimetru, kaip mėginius naudojant hidrofobinais arba polietilenglikoliu padengtų aukso nanodalelių ir jaučio albumino serumo su natrio chloridu mišinį, kuris buvo paruoštas 7,4 pH fosfatiniame buferiniame tirpale, siekiant kuo labiau atkurti sąlygas randamas žmogaus kraujotakoje. Tyrimo metu gauti rezultatai parodė, kad, masės atžvilgiu, hidrofobinai aukso nanodaleles padengia 10 kartų efektyviau nei polietilenglikolis.Darbą sudaro 6 dalys: įvadas, literatūros apžvalga, metodai ir medžiagos, rezultatai, išvados, literatūros sąrašas.Darbo apimtis: 53 p. teksto, 9 paveikslėliai, 5 lentelės, 9 grafikai, 51 bibliografinis šaltinis
Hydrophobins are fungal proteins up to 20 kDa in size, which have the ability to spontaneously assemble into amphiphilic layers on hydrophobic-hydrophilic surfaces, altering their properties. These unique characteristics are determined by their special composition, which includes 8 cysteines connected by disulfide bonds, and a bifunctional molecular structure with both hydrophilic and hydrophobic regions. Due to these properties, hydrophobins are widely used to improve material stability, suppress immunogenicity, modify the activity and hydrophilic or hydrophobic properties of immobilized molecules.The final master's thesis focused on investigating the alteration of gold nanoparticles properties upon coating them with hydrophobins. For this purpose, a plasmid containing the gene encoding AfRodA protein was inserted into Escherichia coli BL21 (DE3) strain. Subsequently, the protein was expressed and then purified using affinity chromatography. Biologically active purified protein was then used to coat the gold nanoparticles. The coating efficiency was investigated using a fluorimeter, with samples consisting of gold nanoparticles coated with hydrophobins or polyethylene glycol, mixed with bovine serum albumin and sodium chloride, prepared in a pH 7.4 phosphate buffer solution to mimic conditions found in the human bloodstream as closely as possible. Investigation showed that in terms of mass, hydrophobins cover gold nanoparticles ten times more efficiently than polyethylene glycol.Thesis structure contains 6 parts: introduction, literature review, methods and materials, results, conclusions, references.Thesis consists of: 53p. without appendixes, 9 pictures, 5 tables, 9 graphs, 51 bibliographical entries.