Nanodalelių citotoksiškumo įvertinimas glioblastomos 2D ir 3D audinių kultūrose
Mlynska, Agata | Recenzentas / Rewiewer |
Bironaitė, Daiva | Darbo gynimo komisijos pirmininkas / Thesis Defence Board Chairman |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member |
Glioblastoma yra labiausiai paplitusi iš greitai progresuojančių smegenų vėžio formų. Priklausomai nuo amžiaus, po šios ligos diagnozavimo, vidutinis išgyvenamumas yra nuo 4,5 iki 19 mėnesių. Taip yra dėl ligos gydymą apsunkinančių aplinkybių - auglio lokacijos, heterogeniškumo ir onkologinių darinių sugebėjimo priešintis gydymui. Todėl yra poreikis kurti naujus metodus, kurie gebėtų efektyviau kovoti su šia liga.Nors ir jau yra sukurta nemaža aibė metodų ir jų kombinacijų, kurie padeda gydyti glioblastomą, tačiau iššūkiai išlieka neįveikti - kraujo-smegenų barjero selektyvus pralaidumas, modelių, gebančių atkartoti natūralią glioblastomos aplinką trūkumas ir užtikrintą veikimą turinčių vaistų stygius.Atliktame darbe yra kuriamos ir standartizuojamos 3D sistemos - sferoidai, kurie geba atkartoti audiniuose augančių glioblastomos ląstelių aplinką, nes yra sudaryti iš U87 glioblastomos ir PKEL endotelinio audinio ląstelių. Pasitelkiant lentivirusinius vektorius yra kuriamos linijos, kurios ekspresuoja fluoresuojančius GFP ir DsRed baltymus. Tai įgalina vizuolų vertinimą dviejų skirtingų kultūrų, augančių viename trimačiame objekte. Suformuoti dariniai yra veikiami skirtingais preparatais - vaistais ir nanodalelėse įkapsuliuotais vaistais bei yra stabimas jų daromas poveikis struktūroms. Vertinimas buvo atliktas stebint fluoresencijos pokyčius, matuojant ATP kiekį sferoide su liuciferaze bei reazurino skaidymą su Alamar blue reagentu, veikiant sferoidus skirtingomis vaistų koncentracijomis. Rezultate buvo nustatyta, kad naudoti vaistai turi sinergistinį poveikį, bei tų pačių vaistų inkapsuliuotų nanodalelėse poveikis kurtoms struktūroms. Darbo apimtis 62 p. teksto be priedų. 29 iliustr., 6 lent., 30 bibliografinių šaltinių
Glioblastoma is the most common of rapidly progressing forms of brain cancer. After diagnosis deppending on patient age average survival length varies from 4,5 to 19 months. Reason for this low survivability are tumor location, heterogenity and treatment resistance. Therefore, there is a requirement of new methods capable of treating this disease.Even though there are pleanty of methods and their combinations designed to treat glioblastoma, there still are challenges such as blood-brain barrier selective permeability, lack of optimised model systems that recreate natural habitat of glioblastoma and deficiency of efective drugs.This work describes standartized 3D system - sferoids, that incorporates U87 glioblastoma and PKEL endothelium cells to create environments similar to natural glioblastoma environment. Lentiviral vectors are used to create cell lines that express GFP and DsRed proteins which allows us to visualize two different type of cells in single 3D structure. Sferoids themselves are being treated with different type of drugs and encapsulated drugs in nanoparticles in order to get a better understanding about their effects. The evaluation is being performed by observing fluorescent changes, measuring ATP with liuciferase and metabolic activity with Alamar Blue reagent while sferoids are affected by different concentrations of drugs. This research provide insight on drugs used in research synergistic effect and cytotoxicity of same drugs while encapsulated in nanoparticles.Thesis consists of 62 p. text without appendixes. 29 pictures, 6 tables, 30 bibliographical sources.