Nuo PQQ priklausomos gliukozės dehidrogenazės ir fenoksazino propioninės rūgšties konjugato sintezė ir savybių tyrimas
Urbanavičiūtė, Justina |
Baigiamasis magistro darbas skirtas nagrinėti gliukozės dehidrogenazės (GDH) fermento bei fenoksazino propioninės rūgšties (PPA) konjugatų savybes. Literatūros apžvalgoje nagrinėjamos GDH fermento savybės bei pritaikymas, taip pat mediatorinių molekulių savybės, pritaikomumas, svarba, bei fenoksazino mediatoriaus panaudojimo sritys.Pagrindinis darbo tikslas - susintetinti fermento ir redokso aktyvios molekulės konjugatą, kuris turėtų kuo didesnį prisijungusių redokso molekulių skaičių ir būtų elektrochemiškai bei katalitiškai aktyvus.Nustatyta, jog MES buferinis tirpalas yra tinkamesnis konjugatų sintezei, negu fosfatinis buferinis tirpalas. Atlikus redokso molekulių prijungimą prie fermento, jo aktyvumas sumažėja iki 24 %, lyginant su natyviu fermentu. Didžiausias prie baltymo prisikabinusių redokso molekulių skaičius, kurį pavyko pasiekti, yra 6 PPA molekulės vienai fermento molekulei. Į konjugato tirpalą pridėjus gliukozės, buvo stebimas biokatalizinės srovės padidėjimas, kuris parodo, kad prikabintas mediatorius efektyviai tarpininkauja oksiduojant GDH ant elektrodo paviršiaus.
Final master thesis is on the study of synthesis of glucose dehydrogenase (GDH) enzyme and phenoxazine propionic acid (PPA) redox active molecule conjugates and investigation of their properties. Properties and application of GDH, also applicability, importance, and uses of the phenoxazine mediator are considering in literature review.The main purpose of thesis is to synthesize the conjugate of enzyme and redox active molecule, which would be active electrochemically and catalytically.Was determined, that the MES buffer is more suitable for conjugate synthesis than the phosphate buffer. When the redox molecules are attached to the enzyme, its activity is greatly reduced (24 %, compared with native GDH enzyme). The greatest number of redox molecules attached to the protein that was reached was 6. An increase of biocatalytic current was observed upon addition of glucose to the conjugate solution, indicating that the attached mediator effectively mediates the oxidation of GDH on the electrode surface.