L - arginino įtaka rekombinantinių augimo hormonų intarpinių kūnelių susidarymui Escherichia coli ląstelėse
Anotacija Šiame darbe buvo tiriama L - arginino įtaka rekombinantinių augimo hormonų intarpinių kūnelių susidarymui Escherichia coli ląstelėse. Darbo metu buvo ištirta įvairių koncentracijų L - arginino įtaka rekombinantinių kAH ir aAH baltymų ekspresijai ir pasiskirstymui tirpių ir netirpių ląstelės baltymų frakcijose, kultivuojant E.coli ląsteles žemose temperatūrose. Buvo atlikti kontroliniai producento auginimai Luria Bertani terpėje be papildomų priedų. L- arginino poveikis buvo įvertintas lyginant su kontrolinių auginimų metu gautais rezultatais. Gauti rezultatai parodė, kad didėjant L - arginino koncentracijai +25 °C temperatūroje stebimas bendros rkAH ir raAH ekspresijos lygio mažėjimas, taip pat mažos L - arginino koncentracijos (50 mM) +25 °C temperatūroje turi teigiamą poveikį tikslinio baltymo tirpumui, tirpių baltymų padidėja iki dviejų kartų. Bendros rkAH ir raAH ekspresijos lygis auginimuose esant 50 mM ir 100 mM L - arginino koncentracijoms +18 °C temperatūroje, labai sumažėja. Stebima tendencija mažėti tikslinių netirpių ir tirpių baltymų kiekiui. Auginant producentą E.coli kamieną BL21(DE3) turinčio plazmidę pET21a+/kAH terpėje esant 50 mM ir 100 mM L - arginino koncentracijoms +18 °C temperatūroje, be tikslinio rkAH baltymo raiškos pastebima ir kitų papildomų baltymų ekspresija. Kultivuojant producento E.coli kamieną BL21(DE3), turinčio plazmidę pET21a+/aAH tokia tendencija nepastebima.Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, metodinė dalis, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros sąrašas.Darbo apimtis - 66 p. teksto be priedų, 17 iliustr., 51 bibliografiniai šaltiniai.
The aim of this work was to analyse the formation of recombinant growth hormones inclusion bodies in Escherichia coli. L -arginine in vivo effect over recombinant pGH and mGH proteins expression and distribution between Escherichia coli soluble and insoluble protein fractions was analysed. Control strain cultivations in Luria -Bertani nutrient broth without any additives were performed. The effect of the objective matters was evaluated in comparison with the results, obtained from control growing. Using Western blot method recombinant growth hormone was found in the electropherogram. The results showed that at +25 °C temperature rpGH and rmGH expression level is a decline when the concentration of L - arginine is increasing. As well as, 50 mM concentration of L - arginine at +25 °C temperature has a positive effect on the solubility of the target protein, soluble protein increases up to two times. The total level of rpGH and rmGH expression with 50 mM and 100 mM concentration of L - arginine decreased significantly. The trend is observed to decrease target amount of insoluble and soluble proteins content. Results of E.coli with rpGH cultivation with 50 mM and 100 mM concentration of L - arginine in media at 18 ° C temperature showed that without target protein we can see others proteins expression in insoluble proteins fraction. In rmGH insoluble proteins fraction, we don't see it.Structure: introduction, literary part, methodological part, results and discussion, conclusions, references.Thesis consists of: 66 p. text without appendixes, 17 pictures, 51 bibliographical entries.