Naujo fermentinio kofeino nustatymo metodo sukūrimas
Gruškienė, Rūta | Recenzentas / Rewiewer |
Bironaitė, Daiva | Darbo gynimo komisijos pirmininkas / Thesis Defence Board Chairman |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member | |
Darbo gynimo komisijos narys / Thesis Defence Board Member |
Kofeinas yra plačiai žmonių naudojama molekulė. Daugelis metabolitų, susidarančių kofeino skaidymo metu yra didelės vertės cheminės medžiagos. Genai, koduojantys kofeiną skaidančius bakterinius fermentus, gali būti labai naudingi atliekant diagnostinius tyrimus, gaminant chemines medžiagas, vaistus, pašarus gyvuliams ir biokurą. Baigiamajame magistro darbe buvo parinktos sąlygos ndmA ir ndmD genų raiškai E. coli šeimininke. Rekombinantiniai NdmA ir NdmD baltymai, dalyvaujantys N-demetilinimo reakcijose, buvo išgryninti, dializuoti bei sukoncentruoti. NdmA ir NdmD fermentų komplekso aktyvumas buvo tikrinamas vykdant reakcijas su L-triptofano ar Purpald reagentais bei analizuojant mėginius su HPLC. Tokiu būdu buvo siekiama sukurti naują fermentinio kofeino nustatymo metodą. Norint pasiekti šį tikslą, reikia optimizuoti tiriamos kofeino N-demetilinimo reakcijos sąlygas. Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir metodai, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros šaltiniai. Darbo apimtis - 55 puslapiai, 19 iliustr., 8 lent., 2 graf., 44 bibliografiniai šaltiniai.
Caffeine is a molecule widely used by humans. Many of the metabolites produced during the breakdown of caffeine are high value chemicals. Genes encoding bacterial caffeinedegrading enzymes can be very useful for diagnostic tests, chemicals, pharmaceuticals, animal feed and biofuels. In the final master thesis, the conditions for the expression of the ndmA and ndmD genes in the E. coli host were optimized. Recombinant NdmA and NdmD proteins involved in N-demethylation reactions were purified, dialysed, and concentrated. The activity of the NdmA and NdmD enzyme complex was verified using L-tryptophan or Purpald reagents and HPLC analysis. The aim was to develop a new method for the determination of enzymatic caffeine. The aim was to develop a new method for the determination of enzymatic caffeine. In order to achieve this objective, the conditions of the N-demethylation reaction of the caffeine must be optimised. The thesis consists of six parts: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusions, references. The thesis consists of: 55 pages, 19 illustrations, 8 tables, 2 graphs, 44 bibliographical references.